IRMB
Le modèle développé par l’équipe utilise des cellules de peau ou sanguine pour les reprogrammer en cellules souches iPSCs puis les différencier en épithélium bronchique qui a toutes les caractéristiques d’un tissu bronchique normale en microscopie électronique, en coupe histologique (HES), en immunofluorescence et en analyse par séquençage de l’ARN en cellule unique.
IRMB
Equipe de John De Vos
Le groupes de recherche du Pr John De Vos, en étroite collaboration avec celui du Pr Arnaud Bourdin, a mis au point un protocole robuste et reproductible pour la reprogrammation de cellules sanguines humaines en cellules souches pluripotentes induites (hiPSC), ainsi que leur différentiation dirigée en interface air/liquide (ALI) vers un épithélium bronchique multi-cilié (iALI). L’iALI est une forme d’organoïde 2D très proche de l’architecture naturelle de l’épithélium bronchique. Ce protocole de différenciation en bronche, une première en Europe, s’appuie essentiellement sur les connaissances du développement pulmonaire chez l’animal, et consiste en un biomimétisme du développement embryonnaire et fœtal par l’apport successif de facteurs de croissances et de matrices extracellulaires. L’iALI est un épithélium des voies respiratoires avec toutes les cellules attendues pour ce type de tissu : cellules ciliées, caliciformes, basales, club et neuroendocrines. Il peut être obtenu en quantité illimitée à partir d’une lignée iPSC, source cellulaire unique et parfaitement caractérisée. De plus, le groupe a pu utiliser la technologie CRISPR/Cas9 pour valider des gènes impliqués dans le mouvement ciliaire pour mimer la dyskinésie ciliaire primitive (DCP), mais également pour réparer une lignée iPSC dérivée d’une patiente atteinte de DCP. Le laboratoire possède un analyseur Chromium 10X genomics qui réalise du single cell RNA sequencing. Cette technologie permet une analyse approfondie des modifications transcriptomiques de chacun des types cellulaires du tissu. Ensemble, ces approches ouvrent de très nombreuses perspectives de modélisation des pathologies respiratoires et la mise au point de leurs traitements, notamment dans le domaine infectieux.